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慢病毒转染贴壁细胞全流程详解

2025-02-06 慢病毒转染贴壁细胞全流程详解一、细胞种板将细胞种在12孔板中，每孔1.5×10^5个细胞。每孔加入1mlwan全培养基。二、病毒感染1.待细胞生长至30%～50%时开始转染。2.将病毒从冰箱取出，放在冰上融化。3.打开生物安全柜，关闭风机，戴好帽子和口罩。4.弃去培养基，用PBS洗三次。5.每孔加入500ulwan全培养基。6.根据公式计算每孔所需病毒量：每孔病毒量（μL）=MOIx细胞数/病毒滴度（TU/mL）×1000。7.4小时后，再向孔板中加入500ulwan全培养基...

小分子蛋白的WB该如何？

2025-01-23 WB（WesternBlot）是一种常用的生物化学实验技术，用于检测和分析蛋白样品中特定蛋白质的存在和表达水平。它通过将样品中的蛋白质分离并转移到膜上，然后使用特定的抗体识别目标蛋白，并通过化学或免疫检测方法来可视化这些蛋白质。WesternBlot技术通常包括样品制备、SDS-PAGE电泳分离、蛋白转印、封闭和抗体检测、曝光显影等步骤。目前WB被广泛应用于生物医学研究中，用于研究蛋白质表达、翻译后修饰以及蛋白质相互作用等。图1.WB流程图在日常实验过程中，小分子蛋白是非常常...

明明冻存的时候细胞长得好好的，怎么一复苏就完啦？

2025-01-21 不知道大家是否会遇到细胞冻存的时候状态非常不错，结果等到需要用到该细胞的时候怎么也复苏不起来的情况??？或许可能是冻存细胞的时候出现了什么差错？一.细胞冻存的原则：慢冻，细胞在冷冻过程中，如果降温过快，会形成大的冰晶，这些冰晶会破坏细胞结构，导致细胞死亡。详细版本见《细胞冻存的原理是什么？》二.冻存液的配置：常用配置比例：培养基:血清:DMSO=7:2:1适用于大多数细胞系，能够保证细胞在冻存过程中有较高的存活率。血清:DMSO=9:1适用范围：适用于需要长时间保存或者具有特别...

CCK8实验注意事项

2025-01-20 CellCountingKit-8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的进行细胞增殖和毒性分析。基本原理：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓liu酸2甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazandye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增...

CCK8实验一文就懂！

2025-01-20 前面我们在文章《为什么CCK8镜下趋势是对的，测出来的OD值却不对？？》中cue到过CCK8实验，那么CCK8具体到底是什么呢，让我们今天一起详细了解下吧~一、CCK-8实验的基本定义与原理CCK-8实验是一种广泛应用于细胞生物学研究的细胞增殖和毒性检测方法。其基本原理在于利用细胞内的代谢酶将无色的CCK-8试剂（CellCountingKit-8）中的WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐）还原为具有高...

流式细胞术的特点及应用

2025-01-17 一、流式细胞术特点速度快:流式细胞术是一种快速的实验技术，通过对单个细胞或生物颗粒进行逐个检测，测量速度可达每秒数千甚至上万个细胞。灵敏度高:每个细胞只需带有1000~3000个荧光分子，流式细胞术就能够准确检测出来。这种高灵敏度的特性使得流式细胞术成为研究复杂生物系统和细胞内分子水平变化的重要工具。多参数:可应用于多参数分析，通过多色荧光染色同时对单个细胞或生物颗粒的多种特征进行细致分析。这种高度精密的方法使研究人员能够深入研究细胞的内部结构和功能，为疾病诊断和治疗提供重要...

两种流式细胞仪，你选哪种？

2025-01-16 分析型流式细胞仪检测原理将待测样品制成单细胞悬液，在鞘液的包裹下进入流式细胞仪内的检测区域，细胞在激光的照射下会发生散射和折射，产生的散射光信号和荧光信号由不同的通道接收。其中前向角散射光（FSC）的强度与细胞直径成正相关，可以理解为细胞直径越大，FSC越强，细胞直径越小，FSC越弱。所以可以利用细胞的FSC值初步比较细胞的大小，利用FSC值对细胞进行分群和分类。侧向角散射光（SSC）的强度与细胞内颗粒结构复杂程度成正相关（与细胞中所含的细胞器、细胞核等的数量成正比），可以理...

流式细胞术一文Get

2025-01-16 一、流式细胞术流式细胞术（FlowCytometry，FCM）从字面意义理解，Flow—Fluid、Cyto—Cell、Metry—Measurement，是一种对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒（如微球，细菌，小型模式生物等）逐个进行快速定量分析和分选的技术。其特点是通过快速测定库尔特电阻、荧光、光散射和光吸收来定量测定细胞DNA含量、细胞体积、蛋白质含量、酶活性、细胞膜受体和表面抗原等许多重要参数。根据这些参数将不同性质的细胞分开，以获得供生物学和医学研究用的纯细胞群体...