一、培养T细胞成功三要素

1.  优质起始细胞：高活力、高纯度的外周血单个核细胞 或 预富集的T细胞。

2.  充分有效的激活：提供 TCR信号（第1信号） 和 共刺激信号（第二信号）。

3.  适宜的细胞因子支持：提供 IL-2 等关键生长因子，维持增殖与存活。

二、 培养T细胞标准操作流程与关键点

1. 分离与准备

   来源：健康人外周血、白血病细胞系（如Jurkat）、或小鼠脾脏/淋巴结。

   分离：使用Ficoll密度梯度离心法分离PBMC。若需更高纯度，可使用T细胞阴性/阳性分选试剂盒。

   关键点：操作轻柔快速，保持细胞低温（冰上），确保高初始活力。

2. T细胞激活（最关键的步骤）

   经典方法：

       包板法：使用抗CD3抗体（克隆号OKT3）包被培养板/瓶，提供TCR信号；溶液中加入抗CD28抗体，提供共刺激信号。

       磁珠法：使用CD3/CD28抗体偶联的磁珠。这是目前最推荐的方法，能提供均匀、强大的刺激，且易于后续去除（用磁架）。磁珠与细胞的比例通常为 1:1 至 3:1。

   关键点：

       激活时机：分离后尽快进行。

       细胞密度：激活时密度宜在 0.5-2 × 10^6/mL。

       培养基：使用无血清或低血清的专用培养基（如 GT-T551， OpTmizer），添加10% FBS或自体血浆。

3. 扩增与维持

   细胞因子：激活后24-48小时，添加重组人IL-2。起始浓度通常为 100-300 IU/mL，后期可调整。

   细胞密度：维持细胞在0.5-2 × 10^6/mL的生长密度。切勿让细胞过度密集（>3×10^6/mL），否则会加速凋亡。

   换液与补料：每2-3天半量换液或补加新鲜含IL-2的培养基。密切监测细胞密度和活力。

   气体环境：置于37°C，5% CO?的湿润培养箱中。

4. 监测与收获

   每日观察：在显微镜下观察?；罨?/span>T细胞会增大（淋巴母细胞化）、聚集成团。健康的细胞团应大小适中、透亮。

   活力检测：定期用台盼蓝染色或自动化细胞计数仪检测活率，应保持在90%以上。

   表型检测：可用流式细胞术检查活化标志物（如CD25， CD69）和记忆/效应亚群。

   收获时机：通常在激活后10-14天达到扩增峰值。当细胞活力开始下降或增殖放缓时，应尽快收获用于实验或冻存。

 出错速查表：“我的T细胞怎么不听话？"

三、一句话总结“养好T细胞"的秘籍

选好起点：高纯度的起始细胞是后续成功的基石。

底盘扎实：优质的培养基与精确的细胞因子搭配是健康保障。

刺激科学：CD3/CD28激活+细胞因子驱动是实现高效扩增的核心。

环境舒适：控制密度、及时传代，别让T细胞“挤着、累着"。

目标导向：根据应用目标（快速杀伤vs长期持久）定制培养策略。

养T细胞像养“免疫小将"，需要细心也要有点创新精神。掌握这些实用经验，你也能轻松进阶“高手"行列！希望本指南能帮你少走弯路，把实验做得又快又好！

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