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蛋白质纯化的原理是什么？

2023-11-30 蛋白纯化是指通过基因工程技术将编码蛋白的核酸序列导入到宿主细胞，使其大量表达，再使用适当的纯化方法将其在体外纯化出来，从而获得高纯度、活性和产量的蛋白质。蛋白质表达系统可以分为原核表达系统和真核表达系统两大类。那么你知道蛋白质纯化的原理是什么吗？让我们一起来看看吧！一、乳糖操纵子的负调控在没有乳糖存在时，lac操纵子处于阻遏状态，此时，I序列表达Lac阻遏蛋白与O序列结合，阻碍RNA聚合酶与P序列结合，抑制转录启动。当有乳糖存在时，乳糖进入细胞，经β-半乳糖苷酶催化，转变为异...

琼脂糖凝胶电泳的常见问题有哪些？

2023-11-29 琼脂糖凝胶电泳是根据核酸（DNA或RNA）分子大小来分离和识别物质的技术。那么你知道琼脂糖凝胶电泳的常见问题有哪些吗？让我们一起来看看吧！一、同样大小的DNA一起跑电泳条带不一样大DNA条带不一样大，本质上是DNA在凝胶中的迁移率不一样，有的跑得快，有的慢，通常情况同样大小的DNA，迁移率是一样的，条带位置也会一样。但迁移率也受很多因素影响，例如DNA的构象。例如环状超螺旋结构的DNA，和同等大小的线性DNA（例如单位点酶切后的质粒），前者的迁移率要高，表现出来就是看上去超螺...

细胞计数通用步骤有什么？有何注意事项？

2023-11-29 细胞计数是指对细胞数量进行定量测定的方法。在细胞培养实验中，通过细胞计数来确定细胞培养的密度和数量，可以掌握细胞生长的情况。同时，细胞计数也是衡量不同实验条件下细胞生长情况的重要指标之一。那么你知道细胞计数通用步骤有什么吗？有何注意事项呢？让我们一起来看看吧！一、细胞计数的通用方法1.以贴壁生长的细胞为例，消化后的细胞充分重悬吹散，取一部分转移至干净的EP管内，例如1mL;2.使用酒精棉球轻轻擦拭计数板表面和盖玻片，把后者的边缘微微湿润，然后小心盖在计数板的正中间，边缘要能覆...

你知道什么是缓冲溶液吗？

2023-11-28 你知道什么是缓冲溶液吗？让我们一起来看看吧！缓冲溶液是许多生化反应、生产、实验过程中的重要溶液，对稳定溶液的酸碱度有重要的影响。最常见的几种缓冲体系有磷酸盐缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液、三羟甲基氨基甲烷（简称Tris）-HCl缓冲溶液、羟yi基哌qin乙磺酸（供注射用）（简称HEPES）缓冲溶液。对于绝大多数生物制剂（如疫苗、抗体、ADC偶联药物、脂质体等）而言，实验操作、实际生产以及生物体内的生化反应等都需要在特定的pH值范围内才能正常有效地进行，从而得到准确的实验结论或发挥最...

如何选择缓冲溶液？

2023-11-28 三羟甲基氨基甲烷（Tris）是一种应用非常广泛的有机试剂。它及其衍生物被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备，可用于制作药物、有机合成、生物缓冲剂等。其中在生化实验中，许多蛋白质及核酸相关的实验都需要用Tris作为生物缓冲剂。那么你知道该如何选择缓冲溶液吗？让我们一起来看看吧！TBS即Tris缓冲盐水，是Tris-HCl缓冲盐溶液，为等渗盐溶液加Tris-HCl缓冲液。因为Tris碱的碱性较强，所以可以只用这一种缓冲体系配制pH范围由酸性到碱性的大范围pH值的缓...

细胞消化的方法有哪些？

2023-11-27 细胞消化的方法有哪些？我们的细胞在培养时大部分会以贴壁的形式生长，它们在机体内时，也是与其他细胞或者细胞外基质结合的。细胞培养过程中使用的wan全培养基中的血清，含有许多带阳性电荷的促细胞附着因子(层黏连蛋白Laminine、纤维连接蛋白Fibronectin等胞外基质），能帮助细胞附着于带阴性电荷的底物上，并形成连接、贴壁伸展。使细胞解除这种附着，就是细胞消化。那么你知道细胞消化的方法有哪些吗？让我们一起来看看吧！一、机械消化法直接用培养基吹打或使用细胞刮刀，通过外力使细胞...

ELISA检测时样本实验准备步骤有什么？

2023-11-27 在收集样本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。那么你知道ELISA检测时样本实验准备步骤都有什么吗？让我们一起来看看吧！1.血清室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。2.血浆应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。3.尿液用无菌管收集。离心20分钟左...

阻断ELISA与液相阻断ELISA有什么区别？

2023-11-27 你知道阻断ELISA与液相阻断ELISA有什么区别吗？让我们一起来看看吧！一、本质不同间接的酶标抗体是二抗，与待检抗体结合；阻断酶标抗体是一抗，与抗原结合。间接中底物降解的量与抗体量相等，阻断底物降解量与抗体。二、实验结果不同酶联免疫吸附试验：是酶免疫测定技术中应用zui广的技术，其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体(聚苯乙烯微量反应板)表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除，常用的ELISA法有双抗体夹心法和间接法。OD值不同是因...