美天旎的磁珠分选技术非常成熟和高效。其核心步骤标准化程度高，主要分为阳性分选和阴性分选。以下为您详细解析 MACS® 技术操作步骤，以从单个细胞悬液中阳性分选特定细胞类型为例。整个过程快速、温和，通常在1-2小时内即可完成。

一、美天旎磁珠分选第一步：实验前准备

1.  样本：制备好高质量的单细胞悬液（如从血液、脾脏、肿瘤组织中获取，并经细胞筛过滤去除团块）。

2.  试剂：

       美天旎磁珠：针对您目标细胞表面标志物的荧光抗体-磁珠复合物。

       MACS® 分选缓冲液：通常是含EDTA的PBS+胎牛血清。至关重要，用于洗涤、重悬和上样。

       预冷的洗脱/收集管。

3.  仪器与耗材：

       MACS® 分选架 和 MACS® 分选柱（根据细胞数量选择，如 LS柱 用于最多 2x10^9 总细胞，MS柱 用于最多 10^7 总细胞）。

       移液器、冰盒等。

二、美天旎磁珠分选第二步：细胞标记

1.  计数与离心：对单细胞悬液进行计数，然后离心（如300-400g，5分钟）弃去上清。

2.  重悬：用适量预冷的MACS®缓冲液重悬细胞沉淀。建议用量：每10^7 个细胞使用80-100 μL缓冲液。

3.  加入磁珠：向细胞悬液中加入推荐量的美天旎磁珠（具体体积参考产品说明书）。

4.  混匀与孵育：轻轻吹打混匀，在2-8°C冰箱（或冰上）中避光孵育 15-20分钟。

       关键点：低温孵育可减少非特异性结合和细胞吞噬，保持细胞活性。

三、美天旎磁珠分选第三步：洗涤与重悬

1.  向试管中加入10-20倍标记体积的MACS®缓冲液。

2.  离心，弃去上清，以去除未结合的游离磁珠。

3.  用适量缓冲液重悬细胞。上样体积取决于分选柱的容量（例如，对于LS柱，用500 μL至3 mL重悬）。

四、美天旎磁珠分选第四步：准备分选柱

1.  将MACS®分选柱固定在强磁场中。

2.  用缓冲液润洗分选柱（例如，LS柱用3 mL缓冲液）。让液体自然流尽，此步骤为分选柱“预湿"。

五、美天旎磁珠分选第五步：上样与分选

1.  上样：将细胞悬液小心地加到分选柱中。让细胞悬液依靠重力自然流下。不要用活塞或助推器。

2.  收集流穿液：流下来的液体即为未标记的阴性细胞（非目标细胞），可用收集管接收。

3.  洗涤：待细胞悬液wanquan进入柱床后，分多次加入缓冲液洗涤（如LS柱：3次，每次3 mL）。收集所有的流穿液，这部分也是阴性细胞。

六、美天旎磁珠分选第六步：洗脱目标细胞

1.  将分选柱移出磁场，放在一个新的收集管上。

2.  加入适量的缓冲液（如LS柱用5 mL）。

3.  立即用柱塞 迅速、有力地将缓冲液推过分选柱。这一步是将被磁场吸附的磁性标记细胞（目标细胞） 冲洗下来。

4.  收集到的液体就是您需要的高纯度目标细胞。

七、美天旎磁珠分选第七步：分析与后续使用

1.  可对分选得到的阳性细胞和阴性细胞进行细胞计数和活力检测（如台盼蓝染色）。

2.  通过流式细胞术 检测分选纯度。

3.  细胞可直接用于下游实验：如细胞培养、功能实验、分子生物学分析或单细胞测序。

关键注意事项

1.  保持低温：整个操作过程尽可能在2-8°C或冰上进行，以维持细胞活性和减少非特异性结合。

2.  避免气泡：上样和加缓冲液时，尽量避免产生气泡，以免影响分选柱内的流体动力学。

3.  不要堵塞柱子：细胞悬液必须无团块，否则会堵塞分选柱。

4.  选择合适的柱子：根据起始细胞总数和目标细胞的预期频率选择合适型号的分选柱。宁大勿小。

5.  快速操作：洗脱步骤要迅速，一旦分选柱离开磁场，就应立即洗脱，防止磁珠标记的细胞因磁场消失而重新混入柱床。

6.  缓冲液：务必使用推荐的MACS®缓冲液，其他缓冲液中的Ca2+/Mg2+可能影响分选效果。

分选策略选择

   阳性分?。褐苯?、快速地获取目标细胞。如上文所述。

   阴性分?。和üコ胁幌胍南赴浣痈患勘晗赴?。适用于目标细胞没有特异性表面标志物，或标志物未知的情况，也适用于不希望抗体与细胞表面受体结合影响后续功能实验的情况。

   去除死细胞：可以使用特定的死细胞去除试剂盒，在分选前先去除死细胞，能极大提高分选效率和纯度。

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